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怎样选择试剂,评价试剂是否切合自己实验室条件 ?

2016-07-07 16:57

现在临床PCR实验室使用的试剂大部分都是各生产企业提供的商品化的试剂盒,那么试剂质量的优劣直接决议了实验效果的优劣,而差别厂家试剂的性能、质量和价钱千差万别,怎样选择一款合适的试剂对每个PCR实验室都至关主要,一样平常来说,选择试剂主要从以下几个方面举行评价:

1、重复性  

首先,试剂检测效果的重复性直接展现了试剂的要领学及其质量的优劣,是评价试剂优劣最显着、最直接的指标。  

其次,我们在此说的试剂重复性是指对原始样本检测的重复性,而不是对某一个样本提取的核酸举行重复性的检测和评价。  

最后,试剂的重复性关于疗效检测、用药指导有着重大的意义,一个重复性好的试剂,往往能够在病人的抗病毒治疗历程中,给医生和病人提供最直接、最可靠的数据,让医生和病人对疾病希望有更清晰的熟悉,从而制订合理的治疗计划,实现更好的治疗效果。

2、迅速度  

一个试剂的迅速度往往能够体现该试剂的手艺水平和先进水平,同时关于临床病症的监测有着举足轻重的意义。以乙肝为例来说,我国的乙肝复发率远远大于蓬勃国家,同时由乙肝病毒熏染转换为慢性肝炎、肝硬化、肝癌的患者也居天下前线,这很洪流平上与对低载量病毒监控的严重缺乏有关。美国肝病学会专家组就提出,对乙肝抗病毒治疗历程中,HBV DNA的最低监测点应设置为10IU/ml,而欧洲和亚太肝病学也指出HBV DNA病毒载量应该尽可能小于10IU/ml。这都足以证实,高迅速度关于用药治疗、病程监控等起着重大的作用,迅速度越高,关于疾病的监控效果更好,关于确定治疗的终点,具有起劲的指导作用。

3、定量准确性  

关于临床检测中定量项目来说,试剂盒定量的准确性是很是主要的,也是评价定量试剂盒的一个主要指标之一。卫生部每年都会有2次天下性的室间质评,通过质评效果可以很好的看出试剂盒定量的准确性。  但往往许多时间,实验室在选择试剂的时间都着重与已往的试剂盒较量定量效果的差别,并以已往的试剂盒定值作为标准来参考和评价一种新试剂,着实这种要领不完全可取。不过可以通过同时检测卫生部的质控品来举行较量,这样才使得两种试剂在统一客观标准上举行PK,获得合理公正的评价。  

同时,要验证一个试剂的定量是否准确,我们可以接纳一个高浓度样本,用阴性血清依次举行10倍梯度的稀释,然后选取多家试剂公司的产品举行同步检测PK,考察各公司试剂对样本定值的现实值与理论值的差别,即可判断各公司试剂定量准确与否。 

4、有无内标监测  

内标的一个最主要的作用就是控制假阴性效果的爆发,但在海内临床检测中往往被忽视了,这主要与两个方面有关,一个是之前海内使用的许多荧光定量PCR仪均为单通道的仪器,无法举行多色荧光的检测;海内外PCR行业对内标的研究已不是一个新兴课题,现在海内PCR行业能把内标做得很是好的科研单位或商业化的PCR试剂厂家寥若晨星,这正体现了这一手艺的难度。  

在临床检测中,内标的作用很是主要。在临床检测历程中,怎么做到每一个阴性效果均为真正的阴性效果,从而杜绝因扩增抑制而泛起的假阴性效果呢 ?内标的加入就能够很好的避免假阴性效果了,加入我们做了一个样本,它的目的检测荧光为阴性,内标检测荧光也为阴性,那么这个样本的扩增则受到了抑制,该阴性效果为假阴性,我们必需对该样本举行复检。若是试剂没有内标的话,我们则不可很好的判断该效果是否正常 ?是否可以发报告 ?在发报告时,我们无法包管发出去的效果百分之百的准确;内标的加入,就可以解决我们这方面的懊恼。现在,卫生部的专家也在鼎力大举推许内标的主要性,也是为了包管磨练效果的准确可靠。

5、线性定量规模  

试剂盒的线性定量规模指的是试剂盒最低检测下限和最高检测上限之间的规模,规模越宽说明试剂盒性能越好。

6、UNG酶防污染系统  

PCR反应历程中, 1个拷贝的DNA经由30个循环后,可以增添到10亿个拷贝的产品DNA, 极微量的PCR 产品污染,就可能造成假阳性,因而这是一个值得特殊重视的问题。尿嘧啶糖苷酶(UNG)法:将PCR 产品中的dT用dU 取代。这种dU 化的PCR 产品与UNG 一起孵育,因UNG 可裂解尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架间的N-糖基键,可除去dU 而阻止TaqDNA 聚合酶的延伸,从而失去被再扩增的能力。UNG 对不含dU 的模板无任何影响,UNG 可从单或双链DNA 中消除尿嘧啶,而对RNA 中的尿嘧啶和简单尿嘧啶分子则无任何作用。  

别的,试剂的稳固性、批间差、溯源性(是否溯源于WHO国际标准品)等也都是考察一款试剂盒质量主要指标。

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